Polimerasa Pfu

La polimerasa de ADN Pfu (PfuPol) és una enzima trobada en l'arqueobacteria hipertermófila Pyrococcus furiosus, a on funciona copiant l'ADN de l'organisme durant la divisió celular. En el laboratori de biologia molecular, PfuPol sol utilisar-se per a amplificar ADN en la reacció en cadena de la polimerasa (PCR), a on l'enzima realisa la funció central de copiar un nou bri d'ADN en cada pas d'extensió.

Capacitat proofreading de PfuPol

PfuPol té major termoestabilidad i capacitat proofreading (variable relacionada en la fidelitat de l'enzima) comparada en Taq polimerasa (TaqPol). A diferència d'esta última, Pfu polimerasa posseïx activitat exonucleasa 3' a 5', lo que li permet retirar nucleòtits incorporats de manera errònea de l'extrem 3' del bri de ADN. Consegüentment, Pfu polimerasa generarà productes de PCR en menys errors que aquells sintetisats per TaqPol.

Disponible comercialment, PfuPol generalment posseïx un índex d'error d'1 en 1.3 millons de parells de bases. No obstant, és més llenta que TaqPol, requerint entre 1 i 2 minuts per cicle per a amplificar mil bases de ADN a 72 °C.

L'utilisació de PfuPol en reaccions de PCR resulta també en extrems romos.

PfuPol és llavors convenient respecte a TaqPol en tècniques que requerixquen alta fidelitat de la síntesis de el ADN, podent ser utilisat conjuntament en TaqPol per a obtindre la velocitat d'esta enzima.

Història

Científics associats en la companyia biotecnológica Stratagene, establida en La Jolla, Califòrnia, varen descriure la superioritat de PfuPol en 1991 en el seu treball "Una polimerasa termoestable d'alta fidelitat aïllada de Pyrococcus furiosus", publicat en Strategies 4:34-35 (1991) i Gen en decembre d'aquell any (Gen. 1991 Dec 12;108(1):1-6).