Reacció en cadena de la ligasa

La Reacció en cadena de la ligasa o LCR (de l'anglés, Lligara Chain Reaction) és un método similar a la PCR, pero basant-se en la funció d'una ligasa termoestable (normalment la ligasa de Thermus aquaticus).

De la mateixa manera que en la PCR, en la LCR es pot amplificar una seqüència de ADN concreta, aixina com determinar una mutació d'una base nucleotídica.

Cicles d'amplificament

S'utilisen quatre cebadores (2 parelles), dels quals dos d'ells hibridan a una cadena de el ADN mòle, i els dos cebadores restants a la cadena complementària. Devem aclarir que, encara que els cebadores siguen complementaris entre sí, l'hibridació entre ells s'evita incloent una coa 3’ en els cebadores oposts. A continuació es produïx l'amplificament en cicles, alternant un temps de desnaturalización (en el que es incuban a 95° durant 1 minut), un temps d'hibridació del cebador (4 minuts a 65°) i un temps per a la ligación. Estos passos es repetixen durant 10-20 cicles

Este amplificament solament es produirà si hi ha perfecta complementarietat entre els extrems de cada parell de cebadores, de manera que finalment obtindrem un fragment de ADN l'extensió del qual serà la corresponent a la suma de les bases dels dos cebadores.

Ademés, concretament un dels cebadores de la parella devem afegir-ho fosforilado en l'extrem 5', ya que la ligasa requerix un extrem 5' fosforilado i un 3' lliure per a realisar la seua funció. No obstant, podem utilisar esta característica per a la visualisació posterior, ya que la fosforilación la podem realisar en 32P, de manera que el cebador 5' queda marcat.

Posteriorment, els productes amplificats s'observen en una electroforesis en gel de agarosa.