DAPI
.jpg){kind=link}
DAPI o 4′,6-diamidino-2-fenilindol és una tenyida fluorescent que s'unix fortament a les regions riques en adenina i timina de el ADN, per lo que és àmpliament utilisat en microscopía de fluorescència. És capaç de travessar una membrana celular intacta i pot utilisar-se per a teñir cèlules vives i fixes, encara que travessa la membrana de manera menys eficient en les cèlules vives i, per lo tant, proporciona un marcador de la viabilitat de la membrana.
Història
[editar | editar còdic]DAPI va ser sintetisat per primera volta en 1971 en el laboratori d'Otto Dann com a part de la busca de fàrmacs en el fi buscar un tractament per a la tripanosomiasis. A pesar de que no va tindre èxit com un medicament, una investigació més extensa va indicar que esta molècula s'unix fortament al ADN conferint-li major fluorescència. Açò va encaminar el seu us a l'identificació de ADN mitocondrial per ultracentrifugación en 1975, est va ser el primer us registrat de DAPI com un marcador fluorescent d'ADN.[1] LA intensitat de fluorescència deguda a l'unió de DAPI en les molècules d'ADN va conduir a la ràpida adopció de DAPI com a marcador fluorescent d'ADN usat en la microscopía de fluorescència. El seu us per a la detecció d'ADN en plantes, bactèries i metazoos i partícules virals es va demostrar en la década de 1970, i la tinción quantitativa de ADN dins de les cèlules, es va demostrar en 1977. L'us de DAPI com un marcador d'ADN per a la citometría de fluix també es va demostrar al voltant d'este temps.[1]
Propietats fluorescents
[editar | editar còdic]Quan DAPI s'unix a ADN bicatenario el seu màxim d'absorció és a una llongitut d'ona de 358 nm (ultravioleta) i del seu màxim d'emissió és a 461 nm (blava). Per lo tant en la microscopía de fluorescència DAPI és excitat en llum ultravioleta per a despuix ser detectat a través d'un filtre blau / cian.[2] DAPI també pot unir-se a RNA, No obstant, encara que el seu pico d'emissió és prou ampli no és tan fluorescent. La seua emissió es desplaça a al voltant de 500 nm quan s'unix a ARN.[3][4]
L'emissió de llum blava de DAPI resulta convenient per a microscopistas que desigen utilisar múltiples marcadors fluorescents en una sola mostra (citometría de fluix). Existix un cert solapamiento entre la fluorescència produïda per DAPI i les molècules de vert - fluorescents com la fluoresceïna i la proteïna verda fluorescent (GFP), pero l'efecte produït és mínim. L'us de empalme espectral per este efecte pot ser evident quan es realisa un anàlisis d'image extremadament precís. Un atre us per a la microscopia de fluorescència per a DAPI és el seu popular us el marcage de cultius celulars en la finalitat de detectar l'ADN contaminat en
micoplasma o virus. Les partícules de micoplasmas o virus marcats per DAPI en el mig de cultiu són més fàcils de detectar.[5]
Perfil de exitación i emissió de DAPI
Perfil de Fluorescència d'excitació i emissió de DAPI unit a ADN bicatenario.
Referències
[editar | editar còdic]- Este artícul conté una traducció derivada de «DAPI» de Wikipedia en castellà publicada baix la Llicència de documentació lliure de GNU i la Llicència Creative Commons Reconeiximent-CompartirIgual 4.0 Internacional.