Fraccionament celular
El fraccionament celular o fraccionament subcelular és una tècnica de laboratori, despuix de la disgregació, en la que s'intenta reagrupar les partícules, generalment cèlules o orgànuls celulars, en funció de les seues propietats biofísiques.[1]
Per mig del fraccionament celular es conseguix separar conjunts homogéneus, per lo general d'orgànuls, a partir d'una població heterogénea de cèlules.
Etapes
[editar | editar còdic]Existixen tres etapes principals en el fraccionament celular:
1. Disgregació o trencament (homogeneïsació) de les cèlules i lliberació dels orgànuls. 2. Macrofiltración. 3. Purificació de components celulars o fraccionament celular pròpiament dit: S'apliquen tècniques de centrifugación diferencial i en gradient[1]
Homogeneïsació
[editar | editar còdic]- Artícul principal → Homogeneïsació (Tècnica de laboratori).
El teixit es homogeneiza, normalment en una solució tampó isotónica usant una varietat de mecanismes (moldre, picar, triturar, canvis de pressió, choc osmótico, congelació i descongelación, homogeneïsació en ultrasons...)
S'ampren numerosos dispositius que formen part del equipament de laboratori.[1]
- Homogeneisador Potter-Elvehjem, d'us freqüent, ya que és relativament suau.
- Homogeneisador d'aspes, com el polytron.
- Prensa de French
- Morter en mall
- Sonicador
- Mijos hipotónicos
- Trencament celular en lisozima
La solució es homogeneiza en una solució isotónica per a detindre el dany osmótico, en una solució tampó per a regular el pH, i a una temperatura molt baixa per a evitar danys enzimàtics. Els orgànuls es mantenen en fret, en un mig isotónico i tamponado.
El resultat ara és una pasta fina de líquit, el homogenato de cèlules, que consta de cèlules intactes i components celulars. En un cuidadós treball es mantenen intactes els orgànuls celulars, sent funcionals en gran mida.
Vore Trencament celular para més detalls.
Filtració
[editar | editar còdic]Este pas pot no ser necessari depenent de la font de les cèlules. Si es treballa en teixits animals, és provable que es lliberen restants de teixit conectivo que deu ser eliminat. Habitualment, la filtració es realisa ya siga per mig de l'abocada a través d'un teixit poroso o en un filtrat per succió amprant el corresponent filtre de ceràmica en un tamany de poro adequat.
Purificació
[editar | editar còdic]Es realisa per centrifugación en gradient de densitat o per centrifugación diferencial, aumentant secuencialment la velocitat de gir i la força gravitacional, donant com resultat una separació seqüencial dels orgànuls d'acort en el seu densitat.
Centrifugación en gradient de densitat
[editar | editar còdic]En la centrifugación en gradient de densitat se situa el homogeneizado en un mig en un gradient de densitat i es centrifuga. Ara els components de la cèlula se separen, migrando cada u a la zona de densitat similar. Este método és útil si es desija aïllar components celulars de tamany semblant en una diferència de densitat baixa.
Centrifugación diferencial
[editar | editar còdic]La centrifugación diferencial és un procés de separació que pot separar els components celulars per centrifugación repetida, a velocitats cada volta majors. En estes condicions, els components de la cèlula se separen en funció del seu tamany i densitat: els components de gran tamany i més densos migran més ràpidament fins al fondo a velocitats relativament baixes i formen un sediment.
En l'esquema de la dreta, s'observa un homogeneizado celular en (1) que es centrifuga a baixa velocitat. El precipitat resultant (vert) es compon de components grans i pesats. S'elimina el sobrenadante i es centrifuga a una velocitat alguna cosa major (2). Este procés es repetix i es va aumentant en cada etapa la velocitat d'centrifugación.
Referències
[editar | editar còdic]- ↑ 1,0 1,1 1,2 Homogeneïsació de teixits i cèlules. Tècniques instrumentals en bioquímica i biologia. Francisca Barceló Mairata. Servici de Publicacions i Intercanvi Científic. Universitat de les Illes Balears, 2003. ISBN 8476328087. Pág.138
- Este artícul conté una traducció derivada de «Fraccionamiento celular» de Wikipedia en castellà publicada baix la Llicència de documentació lliure de GNU i la Llicència Creative Commons Reconeiximent-CompartirIgual 4.0 Internacional.