Cromosoma artificial bacterià
BAC, o cromosoma artificial bacterià, és un Vector de clonació usat per a clonar fragments d'ADN (de 100 a 300 kb de tamany; mija de 150 kb) en Escherichia coli, basat en el plásmido factor-F trobat de modo natural en la bactèria E. coli.[1][2][3]
És un dels tipos de vectores de clonació coneguts com "vectores d'alta capacitat", que inclou cósmidos,[4] BACs, PACs i YACs,[5] per contraposició en plásmidos, vectores derivadores de fago lambda, fagémidos i fásmidos, que són de baixa capacitat.
Els BACs són molt utilisats com vectores de clonació per a la construcció de genotecas genómicas, com en el Proyecte Genoma Humà. La seua gran utilisació es deu a la seua notable capacitat, la seua gran estabilitat i el seu baix percentage de quimerismo.
Donat el gran tamany dels BAC recombinantes les estratègies d'introducció més eficients han segut per mig d'electroporación.
Un BAC típic consta de:
para, B, C: control de la replicació
- CMr: cloranfenicol acetil-transferasa (CAT) (gen de resistència a cloranfenicol)
- LacZ’: en un polilinker en el seu interior. S'usa per a l'ensaig d'alfa-complementación.
Procediment de clonació
[editar | editar còdic]a) Es talla el vector en HindIII per a linealizarlo. b) Es desfosforilan els extrems 5’ del vector per a evitar autoligación. c) Es digerix la nostra mostra en HindIII o compatible. Se seleccionen els fragments segons el seu tamany per electroforesis i es purifiquen. d) Portem a terme la reacció de ligación. i) Transferència dels vectores a una cèlula per electroporación.
f) Selecció dels clons en un mig en cloranfenicol i X-gal (són positius els que sobreviuen en cloranfenicol i carixen d'activitat beta-galactosidasa.
Referències
[editar | editar còdic]- ↑ Science.244(4910)
- 1307–1312.ISSN 0036-8075.doi:10.1126/science.2660262.Consultat el 2022-09-24.
- ↑ Proceedings of the National Academy of Sciences.89(18)
- 8794–8797.ISSN 0027-8424.doi:10.1073/pnas.89.18.8794.Consultat el 2022-09-24.
- ↑ The Keio Journal of Medicine.50(1)
- 26–30.doi:10.2302/kjm.50.26.Consultat el 2022-09-24.
- ↑ Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.74(8)
- 3259–3263.ISSN 0027-8424.doi:10.1073/pnas.74.8.3259.Consultat el 2022-09-24.
- ↑ Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.76(8)
- 3829–3833.ISSN 0027-8424.doi:10.1073/pnas.76.8.3829.Consultat el 2022-09-24.
- Este artícul conté una traducció derivada de «Cromosoma artificial bacteriano» de Wikipedia en castellà publicada baix la Llicència de documentació lliure de GNU i la Llicència Creative Commons Reconeiximent-CompartirIgual 4.0 Internacional.